女性排卵是在月经周期的第14天左右，若此时受精成功，则受精卵要产生HCG最快需要6、7天，验孕试纸是通过测尿HCG判断的，HCG真正开始大量分泌是在孕卵着床后，合体滋养细胞开始分泌才大量产生HCG，而孕卵着床至少需要10天，所以用验孕试纸测是否怀孕，最早只需6天，若要比较准确，则要等10天后。
验孕试纸的检测原理是检测人体尿液中绒毛膜促进性腺激素的浓度，虽然在怀孕后几天尿液中就会出现这种激素，但由于浓度比较小，不容易检测出来，只有等怀孕到一定时间才能被检测出，而最佳时间是在月经推迟后的7-10天之间，此时大部分女性尿液中人体绒毛膜促进性腺激素的浓度会达到最高值，测试结果也会最准确。
验孕试纸不宜过早使用，因为女性过早的做尿液测试，所呈现的阴性反应可能是错误的，虽然很多验孕试纸在女性错过正常经期1天后便可做怀孕自测，但并不是所有怀孕女性排放人体绒毛膜促性腺激素的速度和数量都相同，这是因人而异的。所以一般情况下在月经期迟来的7-10天之后再做怀孕自测，结果会可信些。
验孕试纸最好用早上第一次排尿验孕，因为检测的重要指标是胎盘中所分泌的特异性激素HCG，即人体绒毛促性腺激素，女性受孕之后，HCG进入尿液和血液中，在怀孕早期，尿液中的HCG含量较低，不容易检测，人处于睡眠状态的时候，尿液通过身体代谢浓缩，加之睡眠中激素分泌较多，所以晨尿中的HCG浓度比其他时候要高一些，检测早孕也更准确。
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